大鼠雙氫睪酮(DHT)診斷試劑盒(酶聯(lián)**法)

(用于血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液和其它生物體液內(nèi))

原理

采用酶聯(lián)**競爭法檢測血清中雙氫睪酮含量。首先用羊抗兔睪酮包被微孔板，制成固相一抗，然后加入待測血清、辣根過氧化物酶標記雙氫睪酮，使之形成包被抗雙氫睪酮抗體-雙氫睪酮（HRP）復合物，標記雙氫睪酮的結(jié)合量與血清中的雙氫睪酮量成反比。經(jīng)顯色后在酶標儀測定吸光值(OD值)，通過計算機或作圖擬合濃度－吸光度曲線，反算出待測血清中雙氫睪酮含量。

試劑盒組成（2-8℃保存）

準備試劑與收集血樣

1. 收集標本：血清、血漿（EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測，2-8℃保存48小時；更長時間須冷凍（-20 ℃或-70 ℃）保存，避免反復凍融。
2. 實驗各組份試劑使用前充分搖勻。
3. 洗滌液：用重蒸水1:20稀釋（示例：1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水）

檢測程序

1. 加樣：每孔依次各加入標準品，待測樣品100ul。
2. 每孔加入酶標抗原25ul（空白孔除外），充分混勻，置37 ℃暗處反應60分鐘。
3. 洗板：用洗滌液將反應板充分洗滌4-6次，向濾紙上印干。
4. 每孔加入底物工作液100ul，置37 ℃暗處反應15分鐘。
5. 每孔加入100ul終止液混勻。
6. 30分鐘內(nèi)用酶標儀在450nm處測吸光值

結(jié)果計算與判斷

1. 使用線性擬合功能，可選擇logit直線擬合方式。先將空白孔的吸光值設為本底（或稱非特異，空白）。校準品S0到S5的濃度作為X，對應的吸光值減本底后作為Y，選擇Logit擬合方式，擬合方程：ln(百分結(jié)合率/（1-百分結(jié)合率）)=BLog(濃度)+A，從擬合線上計算出待測血清的濃度。從擬合線上計算出待測血清的濃度。

檢驗方法的局限性

溶血、乳糜血樣本響測定結(jié)果。

試劑盒性能

            1. 靈敏度：*小的DHT檢測濃度小于0.1ng/ ml。

2. 特異性：與其他**沒有交叉反應。
3. 重復性：變異系數(shù)均小于10％。

注意事項

            1. 以上標準孔及待測樣品均建議做復孔，每次測定應同時做標準曲線。

2. 洗滌過程很關鍵。洗滌不充分將導致**度誤差及OD值錯誤地升高。

            3. 板條開封后剩余板條要再封好，保持板條干燥。

            4. 本試劑盒宜置4oC冰箱保存。

5. 本試劑盒僅用于科研，不能用于臨床診斷！